изониазид чем опасен для собак
Отравление собак изониазидом
Краткая информация об изониазиде:
Изониазид (тубазид) – лекарственное средство, используемое для лечения туберкулеза всех форм и локализаций. Белый кристаллический порошок без запаха, горького вкуса. После приема внутрь быстро всасывается из желудочно-кишечного тракта. Выпускается в форме таблеток, каждая таблетка содержит 300 мг изониазида. Таблетки белого, на поперечном разрезе желтого или красно-коричневого цвета. При контакте изониазида с водой (снегом) появляются розовые или красные пятна.
Отравление собак изониазидом:
Известно, что собаки менее разборчивы в пище, нежели кошки, и часто подбирают на улице. Эту особенность поведения собак активно используют догхантеры (в пер. с англ. «охотники за собаками»), разбрасывающие приманки с изониазидом. Изониазид включён Американским обществом по предотвращению жестокости к животным в список десяти наиболее опасных для домашних животных человеческих лекарств из-за его особой токсичности для собак.
Внимание! Собаки не в состоянии эффективно метаболизировать изониазид (из-за малой активности N-ацетилтрансферазы). Образование комплекса изониазид-пиридоксин приводит к недостаточности пиридоксина и как следствие снижению синтеза гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК). ГАМК содержится только в нервной системе и принимает участие в процессах торможения центральной нервной системы, обеспечения мозга энергией и контроля за его кровообращением, осуществляя тем самым один из важнейших эффектов – антигипоксический (недопущение кислородного голодания). Недостаток ГАМК приводит к угнетению, слабости, некоординированным движениям (атаксии), судорогам и в конечном итоге к гибели собаки.
Также были зарегистрированы случаи отравления кошек.
Симптомы отравления собак изониазидом:
Первая помощь при отравлении собаки изониазидом:
Важно! Нельзя вызывать рвоту у собак с потерей сознания или судорогами.
После этого незамедлительно вводится антидот изониазида (противоядие) – это пиридоксин (витамин В6). Его можно ввести еще до посещения ветеринарной клиники, так как время в этой ситуации дорого. Пиридоксин не токсичен даже в больших дозах. Оптимальным является внутривенное введение препарата, но при оказании первой помощи на месте случившегося обычно такой возможности нет, и пиридоксин (витамин В6) вводят внутримышечно из расчета 1 мл на 5 кг веса собаки (рассчитайте дозировку для вашей собаки заранее и сделайте себе памятку). Введение пиридоксина может привести к быстрому прекращению судорог и коррекции обменных нарушений, однако сознание иногда восстанавливается лишь через несколько часов.
После рвоты и введения пиридоксина, можно дать собаке адсорбенты: полисорб (1-2 чайные ложки препарата с верхом развести в 1/4 стакана воды) или энтеросгель (в виде геля 1 чайную ложку развести в ¼ стакане воды), в крайнем случае можно дать активированный уголь, но его существенным недостатком является необходимость использования большого кол-ва таблеток – от 8 до 16 таблеток на 10кг веса собаки, предварительно их необходимо измельчить в порошок и развести в воде.
Как можно быстрее необходимо доставить собаку в ближайшую ветеринарную клинику, где специалисты проведут комплекс необходимых мероприятий, направленных на спасении жизни собаки (координаты ближайшей к вам клиники следует узнать заранее).
Профилактика отравлений собак изониазидом:
Будьте внимательны! В последние годы сообщения о гибели собак и разбросанных на земле приманках с изониазидом поступали из самых разных городов России. Чтобы обычная прогулка на улице с вашим питомцем не закончилась трагедией, не оставляйте собаку без присмотра на улице, научите ее не подбирать на улице и не брать угощений от незнакомых людей. Если это невозможно, оптимально будет надеть на собаку намордник, конструкция которого исключит возможность поедания собакой приманок с ядом и выгуливать ее на коротком поводке, чтобы контролировать поведение и вовремя предотвратить беду. Не лишним будет иметь в аптечке для своей собаки, помимо адсорбентов, упаковку пиридоксина и шприцы.
Изониазид чем опасен для собак
 |  |
Товары
Аптека
Это должен прочитать и запомнить каждый владелец!
Я сама потеряла великолепную молодую собаку, которая погибла из-за того, что сунула нос в крысиную нору обработанную ядом, а потом просто облизалась. От момента первых симптомов до смерти прошло всего 20 часов и все это время собака была в клинике… А потом спустя 10 лет ее внучатая племянница погибла по такому же сценарию за 22 часа и то же практически все это время она провела в клинике.
Первое самое важное!
Вы всегда в любое время суток на прогулке должны постоянно видеть что делает ваша собака. Вы обязаны научить собаку ни когда и ни чего не подбирать с земли, никогда и ни чего не брать из рук незнакомых людей! Это основа безопасности! Это, как ни кошмарно это звучит, основа выживания наших собак в городе.
Второе самое важное!
Как вызвать рвоту (промывание желудка).
Третье.
Если у собаки внезапно началась неукротимая рвота пеной, обильное слюноотделение, потеря координации, судороги и вы допускаете, что она съела что-либо на улице- то предполагаем худшее и начинаем мероприятия как при отравлении изониазидом. (см. ниже.)
Четвертое.
Антидотом к изониазиду является
А теперь о деталях.
1. В первую очередь сразу ввести витамин В6! (Он является антидотом! Продается свободно в любой аптеке!) Внутримышечно, небольшим собакам, приблизительно до 20 кг, около 4-5 мл. Более 20 кг приблизительно 6-7 мл. Не нужно заморачиваться на счет передозировки этого витамина. В данной ситуации в указанных дозировках он не нанесет вреда и не убьет животное. Хуже будет, если вы введете более низкие дозировки, чем указано, животное может погибнуть.
2. Срочно проводят мероприятия по удалению отравляющего вещества из ЖКТ т.е. вызвать рвоту (см. выше)
После всего этого срочно в клинику для проведения дальнейшей терапии и обязательно сообщить вету что вы делали в каком часу в каком количестве и что изначально было с собакой.
Мои комментарии.
ЭТИОЛОГИЯ
Большинство родетицидов являются антикоагулянтами. Различают родетициды 1 поколения (варфарин (зоокумарин)) и родентициды 2-го поколения созданные для избавления от варфарин-устойчивых грызунов (дикумарол, кумафурил, дифенакум, бродифакум, куматетралил, бромадиолон и др.). Как правило, родетициды 2-го поколения обладают более выраженной токсичностью и длительным передом выведения (4-6 дней против 14 часов у варфарина).
Механизм действия большинства родентицидов заключается в ингибировании витамина К, который участвует в процесс синтеза факторов свертывания. После попадания в организм необходимо некоторое время пока собственные запасы витамина К исчерпаются, после чего в условиях прекращения синтеза собственного витамина К, постепенно развивается дефицит факторов свертывания со всеми вытекающим отсюда последствиями.
Типичное время начала развития клинических симптомов варьирует от 3 до 5 дней от попадания родентицида в организм.
КЛИНИЧЕСКАЯ КАРТИНА
Наиболее частыми симптомами по мере убывания являются (по мере убывания):
Диагностика основывается на анамнезе, описанных выше клинических симптомах, анализе крови (анемия (регенеративная и нерегенеративная), тромбоцитопения, гипопротеинемия, повышение ЩФ (вследствие гипоксии), возможно небольшое повышение печеночных ферментов, специфично повышение протромбинового времени и времени активированного свертывания и изменения прочих параметров коагулограммы).
ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНЫЙ ДИАГНОЗ
Отравление антикоагулянтами у собаки и кошек следует дифференцировать от других возможных причин кровотечений:
Ответ на пробную терапию витамином К1 позволяет отдифференцировать большинство из перечисленных выше патологий.
ЛЕЧЕНИЕ
Т.е. вызов рвоты и назначение после этого сорбентов (активированный уголь по 1 таб. на кг 4 раза в день в течение 2-3 дней) с последующим приемом слабительных. На этой стадии у большинства докторов возникает дилемма относительно назначения витамина К превентивно. Однозначного мнения на этот счет нет. Решение этой дилеммы должно базироваться на анализе возможной дозы яда, сроках его потребления, успешности деконтаминационных процедур. Если терапия витамином К не инициирована необходимо провести тесты свертывающей системы через 24-36 часов и повторно через 96 часов. Если время свертывания увеличено необходимо начать агрессивную терапию витамином К и трансфузию плазмы.
Терапия пациентов поступивших в клинику с нарушением свертываемости на фоне употребления родентицидов базируется на трех принципах:
Восстановить недостатающие компоненты свертывающей системы (переливание плазмы или цельной крови в зависимости от количества эритроцитов) с целью приостановить возможные кровотечения.
Обеспечить поступление витамина К1, с тем чтобы в печени могло начаться производство собственных факторов свертывания.
Обеспечить поддерживающую симптоматическую терапию и покой (желательна госпитализация в стационар на срок не менее 24 часов).
1. В отношении переливания крови важно помнить, что при выраженной анемии это является обязательным составляющим звеном терапии. В случае слабо выраженной анемии можно переливать плазму. Плазма переливается из расчета 6-10 мл/кг (при необходимости до 20 мл в сутки на кг), цельная кровь в зависимости от гематокрита (12-20 мл/кг). В черезвычайных случаях возможна аутотрансфузия крови из брюшной/грудной полости, не забывая при этом что факторы свертываемости мы тем самым не пополняем.
2. Специфическая терапия подразумевает введение первой загружающей дозы К1 подкожно или перорально из расчета 2,5 мг/кг для родентицидов первого поколения и 5,0 мг/кг для родентицидов второго поколения, в случаях когда поколение родентицида не известно обычно используют 2,5-5,0 мг/кг. После введения первой дозы антидота переходят на поддерживающую терапию пероральной формой препарата из расчета в среднем 2,5 мг/кг в стуки (0,25-2,5 при отравлении варфарином и 2,5-5 мг/кг при отравлении родетицидами 2-го поколения), разделив дозу на 2-3 приема.
При этом важно давать препарат с едой, например с консервами, поскольку в данном случае его эффективность возрастает в 4-5 раз. Побочные эффекты при применении этого препарата даже в высоких дозах встречаются крайне редко, поэтому не бойтесь быть агрессивными.
Принятие решения о прекращении терапии должны быть комплексным и основываться на пробной отмене препарата по истечению 2-4 недель и контрольными анализами свертывающей системы крови (например, протромбиновое время) через 36-48 и 96 часов после отмены.
Важно помнить, что препаратом выбора является именно К1 (фитоменадион), а не К3 (викасол).
Викасол не способен восполнить необходимый дефицит витамина К, при этом в высоких дозах 25 мг/кг способен вызывать поражения печени, метгемоглобинурию и некоторые другие негативные последствия, именно поэтому в штатах его запретили к использованию в ветеринарии с 1985 г. Если нет никакой возможности достать К1, то можно конечно пробовать и викасол (1 амп/кг), однако важно помнить, что эффективность его сомнительна и такую терапию следует рассматривать скорее как терапию отчаяния.
ПРОГНОЗ
И мои личные комментарии.
Изониазид чем опасен для собак
Здравствуйте. Из по вашему вопросу у меня сложилось ощущение, что вы ветеринарный врач. Если это не так, можете передать этот алгоритм вашему врачу, если это необходимо.
Если это действительно отравление изониазидом, сразу после поступления собаке нужно ввести внутривенно пиридоксин в дозе 50-100 мг/кг (это 1-2 мл на кг). Обычно на фоне введения этой дозы судороги уже прекращаются. Это и является основным лечением отравления. Могут потребоваться повторные введение с интервалам 8-12ч, если симптомы будут повторяться. Детоксикацию можно дополнить пероральными сорбентами +/- форсированный диурез.
Продолжительные судороги и гипертермия могут стать причиной отека головного мозга. В случае наличия признаков отека головного мозга (отек диска зрительного нерва, нарушение реакции зрачков на свет, упирание головой) можно применять манитол в стандартных дозах (0,5-1 г/кг в/в за 20-30 мин). Поскольку этот препарат является осмотическим диуретиком, непременно нужно восполнить затем дефицит жидкости солевым раствором, например использовать раствор Рингера. Растворы глюкозы не рекомендуется использовать, т.к. они являются источником свободной воды и могут приводить к развитию отеков, в т.ч. головного мозга.
Чем травят собак. Несколько советов, как защитить своего питомца от яда на прогулке.
Яды, используемые догхантерами:
— Изониазид — противотуберкулезный препарат. Попадая в организм животного, провоцирует сильнейшие муки и приводит к летальному исходу в течение 10 часов.
— Метоклопрамид — противорвотное средство. Его компоненты смертельно опасны для собаки, так как парализуют органы дыхания. Пес «сгорает» за два дня.
— Дигиталис (дигоксин). Передозировка приводит к нарушению работы сердечно-сосудистой системы. Животное умирает через 10 дней.
— Мышьяк — симптомы отравления (рвота, понос, хриплый лай, судороги) проявляются в течение двух часов. Без своевременной помощи животное погибает.
— Нарушение координации движений.
Заметив один из указанных симптомов, сразу обратитесь в ветклинику.
Как избежать отравления
Для того, чтобы случилось непоправимое, пес должен съесть заметную порцию «вкусняшки» с отравленной начинкой — утверждают кинологи. Если на прогулке быть предельно внимательным, не заметить это будет очень сложно.
Придерживайтесь следующих правил:
— Внимательно следите за тем, что ваша собака может съесть вне дома.
— Выгуливайте животное в наморднике, так риск попробовать что-нибудь не то исключается.
— Держите собаку на поводке, а отпуская, не упускайте из вида.
— Не позволяйте чужим людям кормить вашего питомца.
Как оказать доврачебную помощь
П ри первых подозрениях на отравление необходимо выполнить следующие действия:
̶ Очистить желудок. Для это животное нужно напоить большим объемом кипяченой воды, а затем вызвать рвоту.
— Сделать укол внутримышечно витамин B6 (пиродоксин, можно купить в любой аптеке). Нередко догхантеры выбирают в качестве яда изониазид. Витамин В6 является его антидотом. Доза для собак с массой тела до 20 кг составляет 4-5 мл, для остальных — 6-7 мл. Не бойтесь передозировки — вколоть лишнее в этом случае сложно.
— Разведите в воде активированный уголь из расчета одна таблетка на один килограмм веса и дайте выпить животному. Или воспользуйтесь другими абсорбентами, например, энтеросгелем или смектой.
— После этого немедленно везите собаку в ветклинику.
Здоровье домашних питомцев в руках их хозяев. Помните об этом.
Изониазид чем опасен для собак
Химико-токсикологическая лаборатория Городской наркологической больницы, Санкт-Петербург, Россия, 192167
кафедра фармацевтической химии Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия, 197376
Кафедра фармацевтической химии Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии, Санкт-Петербург, Россия, 197376
Химико-токсикологическое определение изониазида и метоклопрамида в объектах, используемых для отравления животных, и в биологических жидкостях
Журнал: Судебно-медицинская экспертиза. 2018;61(6): 33-38
Чувина Н. А., Качкина М. А., Стрелова О. Ю. Химико-токсикологическое определение изониазида и метоклопрамида в объектах, используемых для отравления животных, и в биологических жидкостях. Судебно-медицинская экспертиза. 2018;61(6):33-38.
Chuvina N A, Kachkina M A, Strelova O Yu. The chemical toxicological determination of isoniazid and metoclopramide in the objects used for animals poisoning and in biological fluids. Sudebno-Meditsinskaya Ekspertisa. 2018;61(6):33-38.
https://doi.org/10.17116/sudmed20186106133
Химико-токсикологическая лаборатория Городской наркологической больницы, Санкт-Петербург, Россия, 192167
В последние несколько лет в городах России отмечается всплеск отравлений домашних собак, которые приписывают так называемым догхантерам (охотники за собаками). Средства, применяемые догхантерами, разнообразны. Приманки часто многокомпонентные, а их состав постоянно меняется и совершенствуется. Цель исследования — разработка методики изолирования и определения изониазида и метоклопрамида в приманках, используемых для отравления домашних животных, и в биологических жидкостях. Эксперименты проводили с использованием водных растворов изониазида и метоклопрамида. Разработанную методику апробировали на биологической жидкости лабораторных животных. Определяли эффективность изолирования указанных веществ из биологических жидкостей методами жидкость-жидкостной экстракции и экстракционного вымораживания. Разработана методика извлечения веществ из объектов методом твердофазной экстракции на патронах марки Oasis HLB.
Химико-токсикологическая лаборатория Городской наркологической больницы, Санкт-Петербург, Россия, 192167
кафедра фармацевтической химии Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия, 197376
Кафедра фармацевтической химии Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии, Санкт-Петербург, Россия, 197376
В последние несколько лет в городах России отмечается всплеск отравлений домашних собак, которые приписывают так называемым догхантерам (дословно — охотники за собаками). Разбросанные на улицах города отравленные приманки представляют потенциальную угрозу не только для животных. Средства, применяемые догхантерами, разнообразны. Приманки часто многокомпонентные: их состав постоянно меняется и совершенствуется. На форумах догхантеров упоминаются такие вещества, как гидрохинон, ДДТ (дихлордифенилтрихлорэтан), некоторые алкалоиды (хинин, эфедрин, стрихнин), рицин, токсины бледной поганки. Нестероидные противовоспалительные средства, антидепрессанты, противотуберкулезные, противоопухолевые препараты, производные витамина D, бензодиазепины, β-адреноблокаторы — любой препарат в высоких дозах может нанести серьезный вред организму и вызвать отравление [1]. По характерной картине отравления, с учетом данных предварительных исследований и информации на форумах догхантеров, установили, что одна из разновидностей приманок содержит изониазид и метоклопрамид.
Производные гидразида изоникотиновой кислоты (ГИНК) — это группа синтетических противотуберкулезных препаратов первого ряда, угнетающих синтез миколовых кислот клеточной стенки Mycobacterium tuberculosis. Вещества данной группы, широко применяемые в длительных курсах терапии при всех формах туберкулеза у человека, по своей природе являются синаптотропными ядами, действие которых опосредовано метаболитами. Основной путь биотрансформации, протекающей с образованием гепато- и нейротоксичных агентов — ацетилирование: при участии ацетилтрансферазы образуется N-ацетилизониазид, который впоследствии превращается в изоникотиновую кислоту и моноацетилгидразин [2]. Нейротоксическое действие изониазида обусловлено снижением содержания пиридоксина в плазме крови и тканях [3]. Интоксикация производными ГИНК может привести к тяжелым необратимым нарушениям в организме человека вплоть до летального исхода. В судебно-медицинской практике известны случаи отравления изониазидом в суицидальных целях и по неосторожности [4]. Для некоторых животных, в частности собак, препараты данной группы представляют смертельную угрозу даже в низких дозах.
Помимо активного вещества, обладающего прямым токсическим действием для собак, приманки могут содержать вспомогательные компоненты, которые напрямую либо косвенно усиливают повреждающее действие токсиканта. Для предупреждения рвотного рефлекса, возникающего у собаки в связи с потенциальной токсической угрозой, злоумышленники добавляют в приманки противорвотное средство метоклопрамид. По механизму действия он относится к антагонистам дофаминовых (D2), а в высоких дозах — и серотониновых (5-НТ3) рецепторов. Метоклопрамид не обладает ярко выраженной токсичностью [5]. У животных отмечается хорошая переносимость препарата. Согласно данным ветеринарного справочника, его не следует назначать животным, склонным к судорогам [6].
Цель исследования — разработка методики изолирования и определения изониазида и метоклопрамида в приманках, используемых для отравления домашних животных, а также в биологических жидкостях (моча) при проведении исследований в судебно-химических отделениях бюро судебно-медицинской экспертизы и химико-токсикологических лабораториях при подозрении на отравление данными веществами.
Материал и методы
Использовали следующее оборудование: газовый хроматограф фирмы «Hewlett Packard» (США) модели Agilent Technologies 7890А с автоинжектором 7693 и масс-селективным детектором 5975С; высокоэффективный жидкостный хроматограф Waters 2695 c ультрафиолетовым детектором 2996; установку для твердофазной экстракции Waters и патроны для твердофазной экстракции марки Oasis HLB. В исследованиях применяли субстанции изониазида марки ЧДА; таблетки изониазида 0,3 г производства ОАО «Акрихин» (Россия); таблетки церукала 10 мг производства ООО «Тева» (Израиль); раствор церукала для инъекций 0,5% производства «AWD Pharma GmbH» (Германия). Приманки, обнаруженные в нескольких районах Санкт-Петербурга, представляли собой куски сосисок, колбасы или фарша различного размера с посторонними включениями в виде таблеток, крупинок или порошкообразной массы. Лабораторные животные — две белые беспородные крысы-самки линии Wistar, массой 0,235 и 0,223 г. Содержание и исследование животных осуществляли в соответствии с действующими принципами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей [7]. Перед началом и в ходе эксперимента животных содержали в стандартных условиях вивария на сбалансированной диете.
Эксперимент. Посторонние включения из приманок в виде размоченных белых таблеток и белой порошкообразной массы отбирали в химический стакан вместимостью 100 мл, растворяли в воде очищенной, подщелачивали 25% раствором аммиака до рН 8,0—9,0 и извлекали универсальным экстрагентом состава дихлорметан/дихлорэтан/гептан/изопропанол в соотношении 2:2:2:1,5. Органическую фазу отбирали в виалу, выпаривали в токе воздуха до объема 500 мкл. Исследование проводили методом ГХ-МС: капиллярная колонка с внутренним диаметром 0,25 мм и длиной 30 м (HP-5MS); газ-носитель гелий, скорость потока 1 мл/мин; температура инжектора 260 °C, интерфейса 290 °С. Температура колонки: начальная 75 °C в течение 1,2 мин, прогрев до 100 °C со скоростью 50 °C/мин; затем прогрев до 290 °С со скоростью 20 °C/мин; выдержка при конечной температуре 8,3 мин. Масс-селективный детектор с температурой источника 230 °C; масс-квадрупольный анализатор; энергия ионизации 70 эл/в. Режим работы испарителя split/splitless без деления потока. Время задержки растворителя 3,7 мин после ввода пробы. Регистрация масс-спектров в режиме Scan полного сканирования ионов в интервале масс 42—450 а.е. На хроматограммах наблюдали два пика со временем удерживания 7,05 и 12,18 мин (рис. 1). 
Рис. 1. Хроматограмма извлечения из приманки. Полученные масс-спектры подвергали автоматической обработке с помощью специализированных токсикологических библиотек. Масс-спектры проб совпали со спектрами изониазида и метоклопрамида (рис. 2, 3). 
Рис. 3. Масс-спектр метоклопрамида, извлеченного из приманки. 
Рис. 2. Масс-спектр изониазида, извлеченного из приманки.
В литературе отсутствует информация о методиках изолирования и определения содержания метоклопрамида в объектах биологического происхождения. Представлены только некоторые реакции с осадительными и цветными реактивами, а также данные спектрофотометрии для фармацевтической субстанции [5, 8, 9].
Для определения изониазида в биологических объектах (кровь, плазма крови) в целях улучшения хроматографических свойств и повышения чувствительности анализа ряд авторов [5, 10] предлагают проводить реакцию дериватизации с помощью 4-гидроксибензальдегида, коричного, салицилового альдегида, 5-метилфуран-2-карбоксиальдегида, пропионового альдегида или 2-флюоренкарбоксиальдегида для последующего анализа супернатанта методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
Для разработки методики изолирования изониазида и метоклопрамида из приманок и биологических жидкостей животных готовили модельные растворы веществ: изониазид с содержанием 400 мкг/мл из субстанции ЧДА; метоклопрамид в концентрации 100 мкг/мл из таблетки церукала. Концентрации веществ подбирали в соответствии с терапевтическими дозами для человека и учетом биодоступности в организме.
Жидкость-жидкостную экстракцию (ЖЖЭ) исследуемых веществ проводили по описанной ранее методике с универсальным экстрагентом. Органическую фазу отбирали в виалу, выпаривали в токе воздуха. Затем сухой остаток растворяли в смеси ацетонитрила сорта 0 с водой, деионизованной в соотношении 60:40, после чего определяли количественно вещества методом ВЭЖХ в следующих условиях: прибор Waters 2695 с колонкой Symmetry C18 размером 5 мкм 3,9×150 мм, температура колонки 30 °C; УФ-детектор с длиной волны 261 нм; объем вводимой пробы 10 мкл; режим подачи элюентов изократический. Подвижная фаза — ацетонитрил/вода деионизованная (60:40). Скорость подачи подвижной фазы 500 мкл/мин. На хроматограмме отмечали пики со временем удерживания 2,2 мин для изониазида и 2,05 мин для метоклопрамида (рис. 4, 5). 
Рис. 4. Хроматограмма изониазида, извлеченного из модельного раствора. 
Рис. 5. Хроматограмма метоклопрамида, извлеченного из модельного раствора.
Содержание веществ в извлечениях рассчитывали по градуировочному графику соответственно изониазида и метоклопрамида. Затем модельные растворы последовательно подвергали экстракционному вымораживанию по следующей методике [11, 12]: к 4 мл раствора добавляли 4 мл ацетонитрила, перемешивали и помещали в морозильную камеру (температура от –18 до –22 °С). После образования в нижней части флакона фазы льда верхний слой ацетонитрила сливали. К ледяной части пробы после размораживания при комнатной температуре 3 раза добавляли по 2 мл ацетонитрила, перемешивали, помещали в морозильную камеру. Объединенные извлечения выпаривали в токе теплого воздуха. Сухой остаток растворяли в 1 мл ацетонитрила и вводили в инжектор хроматографа.
Исследуемые вещества экстрагировали из модельных растворов методом твердофазной экстракции (ТФЭ) на патронах HLBOasis: патроны последовательно промывали 1 мл метанола и 1 мл воды очищенной, затем загружали 1 мл анализируемого модельного раствора. Перед извлечением патроны промывали 1 мл 5% раствором метанола и элюировали 1 мл метанола. Элюат выпаривали досуха. Сухой остаток растворяли в смеси ацетонитрила сорта 0 с водой деионизованной в соотношении 60:40, после чего определяли количественно вещества методом ВЭЖХ в указанных условиях.
Разработанную методику апробировали на биологическом материале лабораторных животных. Концентрацию изониазида и метоклопрамида для введения животным рассчитывали исходя из терапевтических доз веществ для человека в пересчете на крысу. Готовили растворы изониазида и метоклопрамида в 50 мл воды очищенной, последовательно растворяли одну таблетку изониазида 0,3 г и 2 таблетки церукала по 10 мг. Осадок отфильтровывали и отбирали шприцем 3,13 мл полученного раствора, содержащего 18,8 мг изониазида и 1,24 мг метоклопрамида. Приготовленные модельные растворы вводили животным внутрижелудочно через зонд однократно. Собирали суточную мочу — 7,5 мл. Экстракцию веществ из мочи проводили по описанным ранее методикам.
Результаты и обсуждение
Полученные данные о степени экстракции изучаемых веществ статистически обработали по методике, изложенной в ГФ XIII и ОСТ № 220 от 26.05.03 «Правила проведения внутрилабораторного контроля лабораторных исследований с использованием контрольных материалов» [13, 14] (см. таблицу). 
Статистическая обработка данных о степени экстракции изониазида и метоклопрамида (ГФ XIII, p=90%)
Степень извлечения изониазида методом прямой ЖЖЭ из модельного водного раствора при количественном определении методом ВЭЖХ составила всего 3,3±0,2%, ошибка 11,6%, коэффициент вариации (CV) 5,7%. Величина пиков проб метоклопрамида в извлечениях из модельных растворов, полученных с помощью прямой ЖЖЭ, была на уровне чувствительности прибора и оказалась недостаточной для количественной оценки.
Степень экстракции изониазида из модельного раствора методом экстракционного вымораживания составила 9,0±0,9%, ошибка 10,6%, CV=4,9%, а степень экстракции метоклопрамида из модельного раствора таблетки методом экстракционного вымораживания 26,1±0,7%, ошибка 5,6%, CV=2,6%.
Проведенные ранее исследования [15] показали, что твердофазная экстракция (ТФЭ) как метод пробоподготовки — высокоэффективный, сочетающий элементы экстракции и очистки. Настоящее исследование проводили на патронах Oasis HLB, которые обладают липофильно-гидрофильной двойственностью и вследствие этого способны оставаться увлажненными водой, что значительно упрощает работу с ними и делает выход и воспроизводимость постоянными. Отличительным свойством патронов является их способность удерживать широкий спектр полярных и неполярных молекул.
Степень экстракции изониазида из модельного раствора методом ТФЭ составила 53,6±2,5%, ошибка 10,3%, CV=4,8%, а степень экстракции метоклопрамида 72,9±2,9%, ошибка 4,1%, CV=1,9%. На основании полученных данных можно считать ТФЭ высокоэффективным способом пробоподготовки исследуемого вещества. Для ТФЭ изучаемых веществ из модельных растворов были определены некоторые валидационные характеристики. Относительное стандартное отклонение (RSD, %) при оценке сходимости и внутрилабораторной воспроизводимости не превышало 4,3% для изониазида и 1,7% для метоклопрамида, что соответствует критериям приемлемости.
Экстракцию исследуемых веществ из мочи лабораторных животных проводили методом ТФЭ по описанной ранее методике. По результатам четырех измерений концентрация изониазида в моче составила 198,3 мкг/мл, метоклопрамида — 421,3 мкг/мл.
Выводы
На основании полученных экспериментальных данных можно сделать вывод о неэффективности ЖЖЭ для извлечения изониазида (3,3±0,2%) и метоклопрамида из биологической жидкости (моча). Метод экстракционного вымораживания, предложенный отечественными исследователями в качестве альтернативы ЖЖЭ, в том числе для анализа гидрофильных соединений, может рассматриваться как эффективный только в случае изолирования метоклопрамида (26,1±0,7%).
Предложенная нами методика проведения ТФЭ наиболее эффективна и дает воспроизводимые результаты. Она позволяет обнаружить в извлечении 53,6±2,5% исходной концентрации изониазида и 72,9±1,3% метоклопрамида без какой-либо предварительной обработки раствора изониазида реагентами, что значительно сокращает время анализа.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.